Com determinar la concentració òptima?
Per a l'inductor IPTG (isopropil-beta-d-tiogalactoside), com més gran sigui la concentració, millor.La concentració òptima depèn de les condicions experimentals específiques i de l'efecte d'inducció desitjat.
Generalment, la concentració d'IPTG s'utilitza en el rang de 0,1-1 mM.Concentracions més baixes poden reduir els efectes adversos sobre el creixement cel·lular i poden reduir la citotoxicitat a causa de la sobreexpressió de proteïnes diana.Les concentracions més altes poden causar una càrrega metabòlica cel·lular excessiva, afectant el creixement cel·lular i l'eficiència d'expressió.
La manera de determinar la concentració òptima pot ser avaluar el nivell d'expressió de la proteïna diana mitjançant la realització de proves d'inducció IPTG a diferents concentracions.Es poden realitzar proves de cultiu a petita escala utilitzant un rang de concentracions d'IPTG (per exemple, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) i l'efecte d'expressió a diferents concentracions es pot avaluar detectant el nivell d'expressió de la proteïna diana (per exemple, Western blot o detecció de fluorescència).Segons els resultats experimentals, es va seleccionar la concentració amb el millor efecte d'expressió com a concentració òptima.
A més, també podeu consultar la literatura rellevant o l'experiència d'altres laboratoris per entendre l'interval de concentració d'IPTG utilitzat habitualment en condicions experimentals similars, i després optimitzar i ajustar segons les necessitats experimentals.
És important tenir en compte que la concentració òptima pot variar en funció de diferents sistemes d'expressió, proteïnes diana i condicions experimentals, per la qual cosa és millor optimitzar-la cas per cas.
Hora de publicació: 28-set-2023