4-Nitrofenil beta-D-galactopiranòsid CAS:200422-18-0

Efecte: L'ONPG és un substrat utilitzat específicament per detectar la presència i l'activitat de l'enzim β-galactosidasa.Quan l'enzim β-galactosidasa està present i actiu, escinda ONPG en dos productes: o-nitrofenol i un derivat de la galactosa.L'alliberament d'o-nitrofenol provoca un canvi de color groc, que es pot mesurar mitjançant un espectrofotòmetre.

Aplicació: l'ONPG té diverses aplicacions en la recerca en biologia molecular i bioquímica:

Determinació de l'activitat de la β-galactosidasa: l'ONPG s'utilitza habitualment per mesurar i quantificar l'activitat de l'enzim β-galactosidasa.La velocitat de formació d'o-nitrofenol, que és directament proporcional a l'activitat de l'enzim, es pot mesurar espectrofotomètricament.

Expressió i regulació gènica: l'ONPG s'utilitza sovint en experiments relacionats amb l'expressió gènica i els estudis de regulació.S'utilitza freqüentment en assajos de proteïnes de fusió, com el sistema de fusió lacZ d'ús comú, per estudiar l'expressió de gens sota el control de promotors específics.L'activitat de la beta-galactosidasa mesurada mitjançant ONPG proporciona informació sobre el nivell d'expressió gènica.

Cribratge de l'activitat de la β-galactosidasa: l'ONPG es pot utilitzar com a mètode de cribratge colorimètric en tecnologia d'ADN recombinant per identificar la presència i la funcionalitat del gen LacZ, que codifica la β-galactosidasa.Aquest mètode de cribratge ajuda a identificar clons que contenen el gen d'interès.

Estudis de cinètica enzimàtica: ONPG també és útil per estudiar la cinètica de l'enzim β-galactosidasa.Mitjançant la mesura de la velocitat de reacció enzim-substrat a diferents concentracions de substrat, és possible determinar paràmetres cinètics com les constants de Michaelis-Menten (Km) i les velocitats màximes de reacció (Vmax).