4-nitrofenil beta-D-galactopiranòsid CAS: 200422-18-0

Efecte: L'ONPG és un substrat que s'utilitza específicament per detectar la presència i l'activitat de l'enzim β-galactosidasa. Quan l'enzim β-galactosidasa és present i actiu, divideix l'ONPG en dos productes: o-nitrofenol i un derivat de galactosa. L'alliberament d'o-nitrofenol provoca un canvi de color groc, que es pot mesurar amb un espectrofotòmetre.

Aplicació: L'ONPG té diverses aplicacions en la investigació en biologia molecular i bioquímica:

Determinació de l'activitat de la β-galactosidasa: l'ONPG s'utilitza habitualment per mesurar i quantificar l'activitat de l'enzim β-galactosidasa. La velocitat de formació d'o-nitrofenol, que és directament proporcional a l'activitat enzimàtica, es pot mesurar espectrofotomètricament.

Expressió i regulació gèniques: l'ONPG s'utilitza sovint en experiments relacionats amb estudis d'expressió i regulació gènica. S'utilitza amb freqüència en assaigs de proteïnes de fusió, com ara el sistema de fusió lacZ, que s'utilitza habitualment, per estudiar l'expressió de gens sota el control de promotors específics. L'activitat de la beta-galactosidasa mesurada mitjançant l'ONPG proporciona informació sobre el nivell d'expressió gènica.

Cribratge de l'activitat de la β-galactosidasa: l'ONPG es pot utilitzar com a mètode de cribratge colorimètric en la tecnologia de l'ADN recombinant per identificar la presència i la funcionalitat del gen LacZ, que codifica la β-galactosidasa. Aquest mètode de cribratge ajuda a identificar clons que contenen el gen d'interès.

Estudis de cinètica enzimàtica: l'ONPG també és útil per estudiar la cinètica de l'enzim β-galactosidasa. Mesurant la velocitat de reacció enzim-substrat a diferents concentracions de substrat, és possible determinar paràmetres cinètics com ara les constants de Michaelis-Menten (Km) i les velocitats màximes de reacció (Vmax).